检测实验丨Masson染色实验步骤及注意事项

1、 石蜡切片脱蜡至水：

依次将石蜡切片放入

❶二甲苯Ⅰ20min❷二甲苯Ⅱ20min

❸无水乙醇Ⅰ3min❹无水乙醇Ⅱ3min

❺90%乙醇3min❻80%乙醇3min

❼70%乙醇3min❽蒸馏水洗

2、媒染处理：

将切片浸入Bouin液中，于室温下静置过夜，或置于37℃温箱内加速处理2小时，以实现充分媒染。而后使用流水细致冲洗切片，直至黄色完全褪去。

3、天青石蓝染色：

使用天青石蓝染色液对切片进行滴染，持续2至3分钟，确保均匀着色。以少量蒸馏水轻轻冲洗切片，去除多余染液。

4、Mayer苏木素复染：

滴加Mayer苏木素染色液，持续2至3分钟，增强组织结构的对比度。用蒸馏水轻微水洗，去除浮色。

5、酸性乙醇分化：

将切片置于酸性乙醇分化液中短暂分化数秒，以精细调控苏木素染色深度。以蒸馏水冲洗切片约10分钟，确保分化液完全去除。

6、丽春红品红染色：

滴加丽春红品红染色液，染色时间控制在10分钟，以凸显特定组织结构。用蒸馏水轻轻冲洗切片，去除多余染液。

7、磷钼酸处理：

将切片置于磷钼酸溶液中处理约10分钟，以增强后续染色的对比度。

8、苯胺蓝染色：

倾去磷钼酸溶液后，无需水洗，直接滴加苯胺蓝染色液，染色5分钟，进一步丰富组织色彩。

9、弱酸处理：

使用弱酸溶液处理切片2分钟，以优化染色效果。

10、快速脱水：

首先以95%乙醇快速脱水，随后通过三次无水乙醇脱水处理，每次持续5至10秒，确保彻底脱水。

11、透明处理：

将切片置于二甲苯中透明三次，每次1至2分钟，以增强切片的透明度和光泽度。

12、封片：

最后，以中性树胶封固切片，完成整个Masson染色流程。

1、染色时间控制：

染色时间需要根据实验需求进行适当控制。过长的染色时间可能导致染色剂沉淀量增加，影响染色结果的准确性。

2、染色剂的使用：

苯胺蓝和丽春红等染色剂应充分溶解并过滤后使用，以避免杂质影响染色效果。

3、溶液更换：

1%的磷钼酸水溶液需要经常更换，一旦溶液明显变色即应更换，以确保染色效果。