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技术资料/正文
检测实验丨油红O染色实验步骤及注意事项
5071 人阅读发布时间：2024-07-10 14:09
油红O染色
油红O染色是一种常用于检测细胞中脂质积累的染色方法，尤其在研究脂肪细胞和肝脏病理学中具有重要应用。该染色方法通过油红O染料与细胞或组织内的脂质滴特异性结合，使脂质在显微镜下呈现出鲜明的红色，从而便于观察和分析。
一、染色原理：
油红O染色的原理基于油红O染料对脂质的亲和性。油红O是一种溶解在脂质中的染料，具有溶解性，能够渗透细胞膜并与细胞内的脂质滴结合。
由于油红O对脂质的特异性结合，使得含脂质的区域在光学显微镜下显示为特征性的红色，而其他区域则不着色或呈现不同的颜色，从而实现对脂质的可视化。
二、材料与仪器：
实验试剂：
异丙醇、油红O染色试剂盒、甘油明胶封片剂
实验仪器：
冰冻切片机、载玻片、盖玻片、3DHISTECHP250FLASH全景扫描仪
三、实验步骤：
1、 固定：
切片置于4%多聚甲醛中固定10min，用蒸馏水稍微冲洗。
2、60%异丙醇浸洗：
切片入60%异丙醇中浸洗20s。
3、 染色：
切片入油红O染色液中浸染10min。
4、 分色：
切片入60%异丙醇中分化，去除多余染料，蒸馏水冲洗。
5、 复染细胞核：
切片入苏木素中复染2min，蒸馏水冲洗。
6、 封片：
甘油明胶封片剂封片。
※实验结果示例：
正常情况下，脂滴为红色，细胞核为蓝色。
四、注意事项
1、切片选择：
石蜡切片不能用于油红O染色，原因在于石蜡包埋过程中需要脱水，而脱水过程中使用的二甲苯是有机溶剂，会溶解中性脂肪。
2、冰冻切片准备：
冰冻切片准备时，包埋的降温过程建议选择干冰，因为液氮降温过程较强烈，可能导致组织内部炸裂，而干冰降温过程比较缓和，染出来的片子质量更好。
3、染料配制：
油红O染料的配制需要准确，油红O染料需要在异丙醇中配制成饱和溶液，并在使用前通过滤纸过滤。
4、染色时间：
染色时间不宜过长，以免背景染色过深，影响结果的观察。