生化检测丨循环酶法测总胆汁酸（TBA）

总胆汁酸与试剂中的3α-羟甾醇脱氢酶（3α-HSD）和β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸（Thio-NAD）发生氧化反应。在这个反应中，总胆汁酸被氧化成3-酮类固醇和Thio-NAD。生成的3-酮类固醇在3α-羟甾醇脱氢酶（3α-HSD）和β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸（Thio-NADH）存在下，再次发生还原反应。在这个反应中，3-酮类固醇被还原成胆汁酸，并生成了β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）。

循环酶法利用了这个循环反应过程。通过测量单位时间内生成的β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）在405nm处的吸光度变化，可以间接测定胆汁酸的浓度。

1、LDH是主要的干扰物质之一，它可以还原NAD+为NADH，导致高空白值。为了抑制LDH的干扰，可在试剂中加入丙酮酸钠，以阻断LDH催化乳酸为丙酮酸的反应。

2、试剂中加适量表面活性剂可以防止甲腰沉淀。

3、反应混合物的吸光度受到蛋白质的影响。为了减少这种影响，可以将甘氨胆酸钠标准液配制于混合血清中，以更好地模拟实际样品的情况。

4、如果酶制剂用量过多，其中含有的二硫苏糖醇可能会影响INT的还原。

参考文献：

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[3]观察生化试剂对循环酶法测定血清总胆汁酸的干扰因素分析以及改进措施 [J] . 李叶静 . 检验医学与临床 . 2016,第016期

[4]生化试剂对循环酶法测定血清总胆汁酸的干扰原因 [J] . 田光春 . 国际检验医学杂志 . 2015,第012期