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技术资料/正文
生化检测丨连续监测法胆碱酯酶（CHE）
913 人阅读发布时间：2024-02-06 17:11
连续监测法
连续监测法测定胆碱酯酶（CHE）的原理是利用胆碱酯酶催化乙酰胆碱的水解反应。
在连续监测法中，使用无色的5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)（DTNB）作为染色剂。在酸性条件下，TCh与5，5'-二硫代双（2-硝基苯甲酸）（DTNB）反应，生成黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸（5-MNBA）。在410nm处测定吸光度的变化率，即可计算出PChE的活性。
一、测定方法
1、准备反应混合物：将待测样品中的胆碱酯酶与底物丁酰基硫代胆碱混合。确保反应混合物的浓度适当，并根据实验需求进行稀释或浓缩。
2、加入染色剂：向反应混合物中加入无色的5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)（DTNB）染色剂。DTNB与生成的硫代胆碱反应，形成黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸（5-MNBA）。
3、进行连续监测：将反应混合物置于分光光度计中，设置波长为410nm。开始记录吸光度的变化。吸光度的变化与5-MNBA的产生速率成正比，而5-MNBA的产生速率与胆碱酯酶活性相关。
4、计算活性：根据吸光度变化率计算胆碱酯酶的活性。可以根据标准曲线或已知活性样品进行计算，得到待测样品中胆碱酯酶的活性。
二、注意事项
1、确保在适宜的温度和pH条件下进行反应。胆碱酯酶的活性受温度和pH的影响，因此应根据实验要求选择合适的条件。
2、底物丁酰基硫代胆碱的浓度应适当选择，以确保反应速率在可测范围内。过高的底物浓度可能导致酶的饱和，而过低的浓度可能导致反应速率太低，难以准确测量。
3、进行负对照和阳对照实验，以验证实验结果的可靠性。负对照是在反应中缺少胆碱酯酶的样品，阳对照是添加已知活性胆碱酯酶的样品。
参考文献：
[1]人血清假性胆碱酯酶连续监测法测定方法学的建立及其在肝功能评价中的应用 [J] . 杨宏云 ,徐国兵 ,夏铁安 . 中国实验诊断学 . 2003,第002期
[2]连续监测法测定血清中胆碱酯酶 [J] . 毕平安 ,梁国柱 . 佳木斯医学院学报 . 1996,第005期