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技术资料/正文
生化检测丨双缩脲法测定血清总蛋白
2958 人阅读发布时间：2024-02-02 15:32
双缩脲法
血清总蛋白测定是一项常见的实验室检测项目，有多种方法可供选择。其中，双缩脲法是最广泛应用的一种方法。它的原理是在碱性条件下，蛋白质分子中的肽键与二价铜离子（Cu2+）反应生成蓝紫色的化合物。这种颜色反应的强度与蛋白质含量成正比，在一定浓度范围内表现出良好的线性关系。因此，双缩脲法被广泛称为双缩脲反应。
双缩脲法具有操作简单、重复性好和干扰物质较少等优点。它在10-120g/L浓度范围内都能展现出良好的线性关系，操作简便和重复性好，是临床上首选的常规方法。
一、测定方法
1、准备样品：将待测蛋白质溶液制备好，通常需要进行稀释以保证测定结果在检测范围内。
2、制备标准曲线：准备一系列已知浓度的蛋白质标准溶液。可以使用已知浓度的蛋白质标准品或者通过稀释已知浓度的蛋白质溶液得到。一般需要准备5-6个不同浓度的标准溶液。
3、加缩脲试剂：将待测样品和标准溶液分别与缩脲试剂按比例混合，混合后立即放置在室温下孵育一定时间，使蛋白质和缩脲试剂反应。
双缩脲反应
4、测定吸光度：使用紫外可见光谱仪或分光光度计，在适当波长下（通常为280 nm）测定待测样品和标准溶液的吸光度。
5、绘制标准曲线：以标准溶液的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。可以使用线性回归等方法拟合曲线。
6、计算待测样品浓度：根据待测样品的吸光度值和标准曲线，通过插值或计算得到待测样品的蛋白质浓度。
二、注意事项
1、样品处理：样品的制备和稀释要准确无误，避免样品中有其他干扰物质或者稀释不均匀导致测定结果的误差。
2、孵育时间：孵育时间需要足够长，以确保蛋白质和缩脲试剂充分反应，但也不能过长，避免反应过度导致测定结果不准确。
3、标准曲线：制备标准曲线时要注意标准溶液的浓度范围和间隔，确保能够准确插值计算待测样品的浓度。
参考文献：
[1]单试剂与双试剂双缩脲法测定血清总蛋白的比较 [J] . 杨爱华 . 淮海医药 . 2006,第004期
[2]双缩脲法测定血浆总蛋白和血清总蛋白的结果比较 [J] . 蔡淑敏 . 中国社区医师：综合版 . 2009,第009期
[3]半自动生化分析仪测定总蛋白试剂盒(双缩脲法)通用性研究 [J] . 王刚林 ,陈海燕 . 中国药业 . 2012,第021期
[4]右旋糖酐对双缩脲法测定血清总蛋白的干扰 [J] . 卢海景 ,张红凤 ,饶华春 . 国际检验医学杂志 . 2013,第020期
[5]双缩脲法测定血浆总蛋白含量的不确定度评定 [J] . 张玲 ,张玉春 . 甘肃医药 . 2013,第002期