生化检测丨紫外-苹果酸脱氢酶法

紫外-苹果酸脱氢酶法是一种检测苹果酸脱氢酶活性的方法。其原理是利用紫外比色法，通过观察340nm处吸光度的变化来计算苹果酸脱氢酶的活力。

在临床医学上，苹果酸脱氢酶的活性与多种疾病有关，如心肌梗死、溶血性疾病、巨幼红细胞贫血、镰刀型红细胞贫血、急性肝病、癌转移等。因此，该方法被广泛应用于临床诊断和疾病筛查中。

1、配制苹果酸脱氢酶溶液：将苹果酸、NADH和缓冲液混合在一起，用研钵搅拌均匀。

2、设定标准曲线：分别用不同浓度的丙酮酸溶液在紫外分光光度计下测定其吸光度，绘制出标准曲线。

3、加样：将待测样品与标准品溶液分别加入到酶标板孔和空白孔中，注意不要有气泡。

4、温育：将酶标板在37℃下反应一定时间，使样品充分反应。

5、弃去液体：将孔内液体弃去，准备下一步操作。

6、加检测溶液：将检测溶液加入每个孔内，并再次进行温育反应。

7、洗板：洗板三次，保证孔内没有残留物。

8、测定吸光度：最后在紫外分光光度计下测定每个孔的吸光度，根据标准曲线计算出苹果酸脱氢酶的活性。

1、在加样和温育等步骤中，需要保证样品和试剂的混合均匀，避免出现沉淀或分层现象。

2、在弃去液体和洗板等步骤中，需要注意避免样品和试剂的残留，以免影响实验结果。

3、在测定吸光度时，需要注意波长的选择和测量范围，并且要保证样品的稳定性。

参考文献：

[1]紫外-苹果酸脱氢酶法测定乳酸脱氢酶同工酶的实验研究[J]. 中国实验诊断学, 2006, 10(9): 10.

[2]紫外-苹果酸脱氢酶法测定血清苹果酸脱氢酶的研究[J]. 中国临床医学研究杂志, 2007, 13(9): 2.

[3]花生苹果酸脱氢酶基因的克隆及其蛋白序列分析[J]．台州学院学报,2014,036(6):38-44

[4]一个深黄被孢霉苹果酸脱氢酶基因的克隆与表达[J]．生命科学研究,2017,021(3):208-212256

[5]猪心肌细胞质苹果酸脱氢酶的制备[J]．河北大学学报（自然科学版）,1995,000(1):36