生化检测丨紫外-乳酸脱氢酶法

乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase，LDH）是一种广泛存在于生物细胞内的酶，它在糖代谢酵解途径中发挥着重要作用。LDH可以溶解在水或稀盐溶液中。

在组织中，有多种方法可以测定LDH的含量，其中紫外分光光度法更为简单、快速。紫外分光光度法利用了NADH和NAD+在340nm和260nm处的最大吸收峰。由于以NAD+为辅酶的脱氢酶类都会引起340nm光吸收值的变化，因此可以利用这个特性定量测定LDH的含量。

（一）、LDH活力测定：

1、取一个比色杯，加入0.1mol/L pH7.5磷酸氢二钾缓冲液3ml，并将其放置在紫外分光光度计中，在波长为340nm处将光吸收调节至零。

2、取另一个比色杯，依次加入丙酮酸钠溶液2.9ml和NADH溶液0.1ml，并加盖摇匀。加入经稀释的LDH酶液10μl，并加盖摇匀。

在波长为340nm处连续测定3分钟的吸光度变化，记录每个时间点的吸光度值。根据反应曲线，选择最初线性部分的数据进行后续计算。

（二）、数据处理：

计算A340nm/min的减少值，即反应速率。可以通过计算初始线性部分的斜率或使用其他适当的方法来得到反应速率值。

数据处理公式

（三）、计算LDH活力单位：

根据实验条件和反应体系的稀释倍数，计算每毫升组织提取液中LDH活力单位。具体计算方法根据实验设计和所用单位的定义而定。

(1) 实验材料应尽量新鲜，以确保实验结果的准确性。如果不能立即使用，应将材料贮存在-20℃的冰箱中，以防止其变质或降解。

(2) 在进行LDH活力测定时，为了减少实验误差，需要控制酶液的稀释度和加入量，使A340nm/min下降值在0.1-0.2之间。这样可以保证反应速率在合适的范围内，既不会过快导致测量困难，也不会过慢导致测量结果不准确。

(3) NADH溶液应在临用前进行配制。NADH易于氧化，因此最好在使用前即时配制。可以根据实验需要按照适当的浓度配制NADH溶液，并在配制后立即使用，避免其氧化影响实验结果。

参考文献：

[1]流式细胞术和LDH释放法检测NK细胞杀伤效能的实用性比较 [J] . 阳莉 ,丘秀生 ,胡元 . 中国组织化学与细胞化学杂志 . 2021,第001期

[2]LDH释放法检测NK细胞活性的方法学研究 [J] . 何金生 ,宗庭益 . 中国实验临床免疫学杂志 . 1996,第002期

[3]LDH释放法检测肿瘤患者PBMC和CIK细胞的细胞毒活性 [J] . 张蕾 ,李芳秋 ,张士新 . 现代检验医学杂志 . 2008,第006期.

[4]汪重熙,易清．应用荧光、水试和紫外吸收法鉴别伪劣中药材[J]．氨基酸和生物资源,2014,0(3):75-78