生化检测丨免疫透射比浊法

1959年，Schultre和Schuick等人首次报道了将透射比浊法应用于血浆蛋白与其抗体结合后形成复合物，通过测定复合物形成量的多少对抗原或抗体进行定量的方法，这也就是我们所说的免疫透射比浊法。

免疫透射比浊法的基本原理是利用抗原和抗体的特异性结合形成复合物，通过测定复合物形成量的多少对抗原或抗体进行定量的方法。在实际操作中，先以一定浓度的抗体溶液加入抗原溶液中，使之与抗原反应生成一定量的免疫复合物，然后测定该溶液的吸光度或透射光强度，即可求得抗原的含量。

免疫比浊法(Turbidimetric Inhibition Immunoassay)是一种将液相沉淀反应与光学仪器和自动分析技术相结合的分析方法。

该方法的基本原理是，在特定的稀释系统中，当抗原与抗体发生反应并且比例合适（通常抗体过量）时，形成的可溶性免疫复合物会在稀释系统中的促聚剂（如聚乙二醇）的作用下自液相析出，形成微粒，导致反应液出现浑浊。

在免疫比浊法中，当抗体浓度固定时，样品中抗原的增加会导致形成的免疫复合物数量增加，进而引起反应液的浊度增加。通过测量反应液的浊度，并与一系列已知浓度的标准样品进行对照，可以计算出待测样品中抗原的含量。

免疫比浊法具有灵敏度高、操作简单、结果稳定等优点。它广泛应用于临床诊断、生物学研究、药物研发等领域，用于测定血清中的蛋白质、激素、药物、病原体等分子的浓度。

免疫比浊原理示意图

当光线遇到免疫复合物时会发生透射或散射，对透射光或散射光进行检测均可测得反应液浊度，因此可以按照检测仪器将免疫比浊分为免疫透射比浊法和免疫散射比浊法。他们的主要差别为：

1、信号检测方式不同：

免疫透射比浊法主要通过测量入射光的强度变化来检测信号，即入射光的信号减弱。免疫散射比浊法则是通过测量散射光的强度变化来检测信号，即散射光的信号强弱。

2、透射比浊法抗干扰能力强：

相对于免疫散射比浊法，免疫透射比浊法具有更高的抗干扰能力。透射比浊法对于一些可能存在于样本中的干扰因素，如脂血、黄疸、溶血等，影响较小。而散射比浊法对于大颗粒物质（如乳糜、血红蛋白等）的干扰较为敏感，可能导致检测结果与正常结果之间存在较大的偏差。此外，散射比浊法还可能受到其他物理因素的影响，例如加入抗原或抗体的时间、光源的强度和波长、测量角度等。

1、在免疫透射比浊法中，为了确保准确性和可靠性，通常需要对待测样本和抗原标准品/校准品进行适当的稀释。稀释样本可以使其浓度在检测范围内，避免过高或过低浓度对测定结果的影响。

2、免疫透射比浊法可以采用一些技术手段来减少干扰。例如，设置双波长检测可以消除非特异性吸收和散射的影响，提高测定的准确性。进行样本空白测量可以排除背景干扰，从而更准确地测定目标物的浓度。

3、通过在检测前加入聚乙二醇或其他封闭剂，可以有效地阻止非特异性反应的发生，减少背景信号的干扰，提高测定的特异性和准确性。

参考文献：

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