特殊染色丨天狼星红染色

天狼星红染色主要用于定量分析胶原含量。

天狼星红与胶原形成复合物后，该复合物可在酸性环境中显示红色。更重要的是，天狼星红染色后的组织在偏振光下能显示出明显的双折射色，通过这种色彩变化，可以进一步区分不同类型的胶原（如I型和III型胶原）。

1、脱蜡至水：将切片依次放入二甲苯Ⅰ中脱蜡5分钟，然后放入二甲苯Ⅱ中脱蜡5分钟，接着放入二甲苯Ⅲ中脱蜡5分钟，再放入无水乙醇中脱蜡1分钟，接着放入95%乙醇中脱蜡1分钟，然后放入75%乙醇中脱蜡1分钟，最后用蒸馏水洗净5分钟。

2、铁苏木素染色：滴加铁苏木素染色液在切片上染色5-10分钟，然后用蒸馏水洗净10-20秒，去除多余的染色液。

3、自来水洗：用自来水洗净切片，持续洗5分钟。

4、天狼星红染色：滴加天狼星红染色液在切片上染色15-30分钟。

5、冲洗：轻轻流水冲洗切片表面，去除多余的染液。

6、脱水透明：将切片依次放入75%乙醇中脱水1分钟，然后放入95%乙醇中脱水1分钟，接着放入无水乙醇中脱水1分钟，然后放入二甲苯中脱水3次，每次1-2分钟，最后使用中性树胶封固。

天狼星红染色实例

1、切片厚度控制：为了在偏振光镜下显示清晰，建议切片的厚度控制在6~7μm。

2、天狼星红染色液配制：在配制天狼星红染色液时，需要溶解天狼星红的衬染液为过饱和溶液。

3、复染胞核选择：宜使用Mayer苏木精液进行复染胞核，它不会影响Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维的数量和双折射强度的显示。如果没有Mayer苏木精液，可以使用其他明矾苏木素，但在染色时应缩短时间，以免染色过深。

4、染色液存放：天狼星红染色液必须使用专用带塞试剂瓶盛放。对于对光线敏感、容易分解的溶液，应该装在棕色容器中。

参考文献：

[1]天狼星红染色法和MASSON染色法在显示大鼠肾脏胶原纤维的比较应用 [J] . 罗灿峤 ,莫木琼 ,钟觉民 . 临床医学工程 . 2009,第008期

[2]天狼星红对胶原纤维染色的方法 [J] . 张艳 ,陈银成 . 医药论坛杂志 . 2003,第15期

[3]天狼星红偏振光法检测增生性瘢痕组织胶原 [J] . 黎小间 ,雷涛 ,高建华 . 南方医科大学学报 . 2002,第003期

[4]天狼星红偏光法观察软骨性肿瘤的胶原改变 [J] . 申丽娟 ,丘钜世 ,朱全胜 . 临床与实验病理学杂志 . 2001,第004期