特殊染色丨甲苯胺蓝染色

甲苯胺蓝是一种常用的人工合成染料，属于醌亚胺染料类。这类染料通常包含两个发色团，一个是胺基，一个是醌型苯环，这两个发色团共同构成了色原的显色能力。除了发色团外，染料还需要含有助色团，这些助色团能够增加染料与组织及其他被染物之间的亲和力。助色团能够促使染料电离成盐类，并帮助发色团与组织产生染色反应，从而使切片上的组织细胞得以着色。

在染色过程中，甲苯胺蓝可以使细胞核呈现出蓝色，而肥大细胞的胞质中含有肝素和组织胺等异色性物质，与甲苯胺蓝反应后可呈现出异染性的紫红色。因此，甲苯胺蓝可以用于尖锐湿疣的初筛以及肥大细胞的检测。

1、脱蜡至水：使用二甲苯Ⅰ浸泡5分钟，二甲苯Ⅱ浸泡5分钟，二甲苯Ⅲ浸泡5分钟，然后依次使用无水乙醇、95%乙醇和75%乙醇各浸泡1分钟，最后用自来水冲洗数秒。

2、滴加甲苯胺蓝染色液进行染色，染色时间为20-30分钟。

3、流水稍洗，洗去多余的染色液。

4、使用95%乙醇进行分色，在镜下控制分色效果。

5、脱水透明：先使用无水乙醇浸泡1分钟，然后使用二甲苯进行3次脱水，每次1-2分钟，最后使用中性树胶封固。

染色结果：软骨和成骨细胞呈蓝紫色，背景呈淡蓝色。

甲苯胺蓝染色实例

1、在脱水的过程中，最好使用无水乙醇，并确保无水乙醇的含水量不要太高，否则容易导致染色物质脱色。应该使用干净的无水乙醇进行脱水处理。

2、在染色过程中，可以稍微过染一些。这是因为在脱水的过程中，蓝色或紫红色会逐渐褪色。如果背景颜色太深，可以稍微延长脱水时间，直到肉眼观察组织呈现极浅蓝色或接近无色为止。但是脱水时间也不能太长，否则整个颜色会完全褪去，并且肥大细胞的紫红色会变成蓝色。

3、在染色完成后，不要将切片烤干后立即使用二甲苯进行透明封片，因为这样容易导致切片上出现水珠。应该等待切片表面干燥后再进行透明封片的步骤。

参考文献：

[1]不同包埋剂对冷冻切片质量的影响 [J] . 钱萍 ,马时荣 ,阮立新 . 临床与实验病理学杂志 . 2008,第002期

[2]硼砂甲苯胺蓝染液在半薄切片染色上的应用 [J] . 刘冬娟 ,祝素文 ,李艳杰 . 中国医科大学学报 . 2004,第001期

[3]甲苯胺蓝活体染色法在宫颈病变手术切除范围的界定中的作用研究 [J] . 郭宗梁 ,索静 . 内蒙古医科大学学报 . 2017,第006期