特殊染色丨油红O染色

油红O脂肪染色法是一种常用的实验室技术，用于检测组织或细胞内的脂肪情况。

油性红O是一种脂溶性染料，具有很强的脂溶剂和染脂剂的特性。它能与组织和细胞内的中性甘油三脂、脂质以及脂蛋白发生特异性吸附作用，从而使脂肪呈现红色。当油红O染料加入组织切片时，它会从有机溶剂转移到组织内的脂质中，使组织内的脂肪呈现红色。

1、切片固定：将冰冻切片的厚度控制在6-10µm，可以选择不进行固定或者使用10%福尔马林固定10分钟后进行水洗。

2、异丙醇浸洗切片：将切片放入60%的异丙醇中浸洗2分钟。

3、油红O染色液密闭染色：将切片放入改良油红O染色液中，密闭染色10-15分钟，注意避光。

4、洗去染液：加入60%的异丙醇稍微洗去染液（大约几秒钟）。

5、复染核：使用Mayer苏木素染色液复染核5分钟，使用滤纸吸干切片上的水分。

6、封片：使用甘油明胶或阿拉伯糖胶封片。

油红O染色实例

1、石蜡切片不能用于油红O染色，因为石蜡包埋过程中需要脱水，而脱水过程中使用的乙醇-二甲苯和石蜡是有机溶剂，会溶解中性脂肪。

2、冰冻切片准备时，建议在包埋的降温过程中使用干冰而不是液氮。选择液氮进行降温可能会导致组织内部炸裂，而干冰降温的过程相对缓和，染出来的切片效果更好。

3、切片的厚度应稍微厚一些，建议选择8-10μm。较厚的切片可以更好地显示脂肪情况。

4、在实验设计中，建议设计阴性对照和阳性对照。阳性对照可以选择脂质丰富的肝脏组织等，而阴性对照可以根据文献选择无脂肪沉积的组织。这样可以更好地评估染色结果的准确性。

参考文献：

[1]油红O染色在斑马鱼体内脂质染色中的应用 [J] . 陈侃 ,王长谦 ,范虞琪 . 中国组织化学与细胞化学杂志 . 2016,第004期

[2]油红O染色在甲醛固定的乳腺富于脂质癌中的实践应用 [J] . 姜贝贝 ,刘晓红 ,曹瑞雪 . 临床与实验病理学杂志 . 2021,第003期

[3]秀丽隐杆线虫体内脂滴的油红O染色观察 [J] . 姬云涛 ,王亦舒 ,李星辰 . 中国生化药物杂志 . 2011,第002期