超微病理丨透射电镜（TEM）

透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope，TEM）是一种利用经过加速和聚焦的电子束投射到非常薄的样品上的仪器。它的工作原理是通过透射电子束穿过样品，然后通过透射电子显微镜的透镜系统进行聚焦和成像。

透射电子显微镜通常具有0.1～0.2纳米的分辨率和几万到百万倍的放大倍数。它主要用于观察超微结构，即光学显微镜下无法清晰看到的小于0.2微米的结构，也被称为“亚显微结构”。

透射电子显微镜在材料科学、生物学、纳米科学等领域具有广泛的应用，它可以用于研究生物样品的细胞结构和超微结构。

1、取材固定：麻醉动物后，迅速取出需要检测的组织，并将其切割成小于1立方毫米的块。将组织块置于2.5%戊二醛固定液中，在4℃下固定2小时或更长时间。使用0.1M磷酸漂洗液漂洗固定的组织块，每次漂洗15分钟，共漂洗三次。使用1%锇酸固定液固定组织块，固定时间为2-3小时。使用0.1M磷酸漂洗液再次漂洗固定的组织块，每次漂洗15分钟，共漂洗三次。

2、脱水：在4℃冰箱中进行以下步骤进行脱水处理。首先使用50%乙醇进行脱水，时间为15-20分钟；接着使用70%乙醇进行脱水，时间同样为15-20分钟；然后使用90%乙醇进行脱水，同样时间为15-20分钟；接下来使用90%乙醇和90%丙酮（1:1）混合液进行脱水，时间同样为15-20分钟；最后使用100%丙酮进行三次脱水处理，每次脱水时间均为15-20分钟。

3、包埋：使用纯丙酮和包埋液（2:1）进行包埋，室温下固定3-4小时。使用纯丙酮和包埋液（1:2）进行包埋，室温下过夜。使用纯包埋液，37℃下固化2-3小时。

4、固化：在37℃的烘箱中过夜固化；在45℃的烘箱中固化12小时；在60℃的烘箱中固化48小时。

5、切片：使用超薄切片机切割70纳米厚度的切片。

6、染色：使用3%醋酸铀和枸橼酸铅进行双染色。

7、观察拍片：使用透射电镜观察样品，并拍摄片子。

透射电镜实例

1、透射电镜及其附属设备中存在高压电、低温、高压气流以及电离辐射等危险因素。不正确的使用可能导致仪器损坏或人身伤亡。因此，在操作仪器时一定要正确操作，不要打开仪器面板或试图接触未经培训的内容。

2、请勿使用透射电镜观察磁性样品，因为磁性样品可能对电镜造成严重损坏。

3、在使用CCD相机拍照时，务必确保电子束散开。

参考文献：

[1]透射电镜技术研究生课程教学的现状与改革初探 [J] . 陆彦 ,陈义芳 ,刘巧泉 . 山东化工 . 2021,第22期

[2]基础医学本科生透射电镜技术教学设置及体会 [J] . 赵文娥 ,王自彬 ,夏峥嵘 . 基础医学教育 . 2017,第006期

[3]生物医学透射电镜技术实验教学改革的探讨 [J] . 范晓燕 ,林方兴 ,沈亚峰 . 中国校外教育（理论）. 2016,第002期