特殊染色丨普鲁士蓝染色

PB（Perls' Prussian Blue）染色是一种常用的组织化学染色技术，用于检测组织中铁的存在。这种染色方法可以将含铁血黄素与其他棕色色素区分开来，使其在显微镜下呈现出特定的颜色。

在PB染色中，组织样本首先被处理以使铁离子还原成可溶性的亚铁离子。然后，亚铁离子与染料试剂（通常是Prussian Blue）反应形成含铁的含铁血黄素沉淀物。这些沉淀物在显微镜下呈现出明亮的蓝色或蓝绿色。

通过PB染色，可以清晰地观察到细胞内含铁血黄素的存在，从而确定组织中铁的分布和含量。这对于研究铁代谢和相关疾病非常重要，如贫血、铁过载等。

1、组织固定：将组织固定于10%中性福尔马林中，固定过程中，应注意使用适当的固定时间和温度，以确保组织结构的保持和稳定。

2、切片和脱蜡：将固定的组织切片，并进行常规的脱蜡过程，使组织脱去蜡质并恢复到水中。

3、Perls' stain染色：将切片浸入Perls' stain（染色剂）中，浸染时间为15至30分钟。Perls' stain是用于检测组织中铁的染色剂，它能够与含铁的含铁血黄素反应形成特定的颜色。

4、核固红染色：将切片浸入核固红染色液中，染色时间为5至10分钟。核固红是一种常用的核染色剂，用于染色细胞核。

5、常规脱水透明和封固：将切片进行常规的脱水和透明处理，然后使用中性树胶进行封固，以保护切片并固定染色结果。

普鲁士蓝染色实例

1、避免使用酸性固定剂和铬酸盐处理：酸性固定剂和铬酸盐处理可能会破坏组织中的铁结构，影响铁的保存和检测。

2、保持容器的清洁：为了避免干扰染色结果，操作过程中使用的容器应保持干净。最好使用不含铁质的容器，避免使用金属铁制品。在洗切片和容器时，最好使用蒸馏水，因为普通水中可能含有铁质。

3、细胞外铁的涂片：如果需要检测细胞外的铁，可以使用含有骨髓小粒的涂片。这样可以更好地观察和区分细胞内和细胞外的含铁血黄素。

4、根据样本情况调整着色时间：Perls染色的着色时间可以根据样本的具体情况进行调整。染色时间过长可能导致染色过度，而染色时间过短可能导致染色不足。

参考文献：

[1]漂亮的普鲁士蓝——蓝晒法成像工艺介绍 [J] . 张赟 . 早期教育（美术版） . 2020,第009期

[2]水系钠离子电池普鲁士蓝正极材料的制备与电化学性能研究 [J] . 李勇 ,何玮鑫 ,郑芯月 . 无机材料学报 . 2019,第004期

[3]In-Gel Determination of L-Amino Acid Oxidase Activity Based on the Visualization of Prussian Blue-Forming Reaction [O] . Zhiliang Yu, Ning Zhou, Chuntian Zhao, 2010