检测实验丨JC-1 染色（线粒体膜电位检测）

JC-1 染色

JC-1 染色是一种用于检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化的实验方法。JC-1 是一种阳离子脂质荧光染料，被广泛用作检测线粒体跨膜电位（ΔΨm）的指示剂。这种方法通过JC-1荧光颜色的变化来反映线粒体膜电位的高低，从而可用于细胞凋亡的早期检测。

JC-1 在不同的线粒体膜电位下表现出不同的荧光特性。当线粒体膜电位较高时，JC-1 聚集在线粒体基质中，形成聚合物（J-aggregates），产生红色（或橙色）荧光。而当线粒体膜电位降低时，JC-1 不能聚集在线粒体基质中，以单体形式存在，产生绿色荧光。因此，通过观察荧光颜色的变化，可以方便地检测线粒体膜电位的变化。

实验试剂：

胶原酶Ⅳ、胰酶细胞消化液、线粒体膜电位检测试剂盒、1×PBS缓冲液

实验仪器：

移液器、二氧化碳培养箱、倒置荧光显微镜、流式细胞仪、超净工作台、离心机等。

1、吸出细胞培养液至离心管中，PBS洗涤细胞一次，加入适量胰酶消化液消化细胞，室温孵育3min。

2、加入步骤1中收集的细胞培养液，把细胞轻轻吹打下来，转移至离心管内，1000 rpm离心5分钟；弃上清，用PBS轻轻重悬细胞。

3、细胞计数，调整细胞密度，每管细胞数为1*10^6。

4、取100μl 10×Incubation Buffer 加 900μl 灭菌去离子水稀释成 1× Incubation Buffer，混匀并预热至 37℃；

5、吸取 500μl 1×Incubation Buffer，加入 1μl JC-1，涡旋混匀配成 JC-1 工作液；

6、取 500μl JC-1 工作液将细胞均匀悬浮，37℃，5%CO2 的培养箱中孵育 15~20min；

7、室温离心（2000rpm，5min）收集细胞，用 1×Incubation Buffer 洗两次；

8、吸取 500μl 1×Incubation Buffer 重新悬浮细胞，流式细胞仪上机分析。

※实验示例：

JC-1染色