肺结核动物模型

1、实验用小鼠的选择：

选择年龄6~8周龄，体重16~20g， SPF级雌性C57BL/6和BALB/c小鼠（提供厂商:中国医学科学院实验动物研究所）。动物使用申请号:中国医学科学院实验动物研究所实验动物管理委员会（批准号：MC—09-2003）。

2、饲养环境：

动物生物安全3级实验室（ABSL-3）；温湿度范围：18-28℃；相对湿度：40-70％；换气次数：机械送排风；明暗周期：12h/12h；照度：150-300Lux；清洁消毒：用具、笼架等在投入使用前进行消毒；笼具种类及饲育密度：小鼠笼，12只一笼；

3、饲养条件

中国医学科学院实验动物研究所华阜康有限公司小鼠专用饲料,自由采食；垫料为中国医学科学院实验动物研究所华阜康有限公司，定期更换；饮水；普通自来水经过高压(121℃,30min)，自由饮用。

4、实验用小鼠的分组及感染

实验共分为三个大组，第一组为C57BL/6尾静脉注射组、第二组为C57BL/6腹腔注射组和第三组为BALB/c尾静脉注射组，其中每一个大组中分四个小组：正常对照组(生理盐水)、高剂量组（1X10⁶CFU）、中剂量组（1X10⁵ CFU）和低剂量组（1X10⁴ CFU），每组12只小鼠，共144只小鼠。

5、感染用菌株

用结核分枝杆菌标准菌株H37Rv株或结核耐药株（内部编号94789）。

6、观察

小鼠在进入ABSL-3实验室之后,观察4~5天后,进行感染实验。感染后，观察每天感染小鼠的临床症状，并每周称取小鼠体重，观察不同感染方式和不同感染剂量小鼠体重的变化规律。

7、病理检查和组织荷菌量计数

分别在感染后6周、8周和10周，每组解剖3只小鼠，分别无菌取小鼠1/2脾脏、1/2肺脏，无菌研磨后接种L-J斜面进行结核分枝杆菌的分离培养。并将同一组织的剩余部分固定在10%福尔马林中，进行病理切片。